概述
活细胞水平的代谢标记金标准。SILAC(细胞培养稳定同位素标记)在培养体系中加入重/轻同位素氨基酸,使标记在蛋白翻译时即完成,混样发生在细胞裂解前,因此可完全消除样品制备环节的定量误差,被公认为活细胞定量蛋白质组的金标准。
技术优势
- ✓ 标记在裂解前完成,前处理误差趋近于零
- ✓ 与泛抗体富集联用构成 SILAC 修饰组学(经典 E3 底物筛选方案)
- ✓ 定量精度高,适合精细机制研究
- ✓ 兼容pull-down/Co-IP 定量互作组学
实验流程
具体流程将根据样品类型与项目目标定制,最终以技术方案为准。
应用方向
E3 连接酶/激酶底物筛选(配合相应富集)
药物时间进程的蛋白组动态监测
蛋白相互作用定量分析
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | PBS 清洗后离心去除上清,液氮速冻,干冰运输 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 新鲜组织液氮速冻,-80 °C 保存,干冰运输 |
| 体液样品 | 血清/血浆 ≥ 100 µL | 低速离心取上清,-80 °C 保存,干冰运输 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 建议设置阴/阳性对照或内参样品 |
