瓜氨酸化泛抗体富集试剂盒（Kcit） | 试剂产品

瓜氨酸化泛抗体富集试剂盒

Pan Anti-Citrulline Enrichment Kit（Kcit Kit）

高亲和力修饰泛抗体，位点级特异性富集

富集倍数 ≥ 100×，显著提高瓜氨酸化修饰鉴定精度

适用于修饰组学质谱前富集与 WB/IP 修饰验证

随盒 SOP 与质检报告，技术团队全程支持

货号：MH-KCIT-10（10 rxn）/ MH-KCIT-50（50 rxn）

产品描述

蛋白质瓜氨酸化（Citrullination）由 PAD 酶家族催化精氨酸（Arg）脱亚胺转化而来，正电荷精氨酸转变为中性瓜氨酸并释放氨，修饰丰度低、信号易被高丰度非修饰肽段掩盖。本试剂盒以经修饰肽段亲和纯化的高亲和力瓜氨酸化泛抗体（anti-Kcit）为核心，偶联于顺磁珠/琼脂糖凝胶，可从复杂酶解肽段中特异性捕获瓜氨酸化修饰肽段，配合高分辨质谱即可完成全蛋白水平瓜氨酸化修饰位点的大规模鉴定与定量；亦可用于免疫印迹、免疫沉淀验证整体瓜氨酸化修饰水平变化。瓜氨酸化由PAD酶家族将精氨酸转化为瓜氨酸，改变蛋白电荷与结构。瓜氨酸化组蛋白参与中性粒细胞胞外陷阱（NETs）形成与自身免疫表位暴露，抗瓜氨酸化蛋白抗体（ACPA）是类风湿关节炎分类标准的核心指标，也是肿瘤免疫治疗新兴研究热点。

产品组分

组分	规格（10 rxn / 50 rxn）	保存条件
修饰泛抗体偶联磁珠/琼脂糖凝胶	500 µL / 2.5 mL	20% 乙醇，2–8 °C，勿冻融
结合缓冲液（5×）	10 mL / 50 mL	2–8 °C
洗涤缓冲液 I / II / III（10×）	各 10 mL / 各 50 mL	2–8 °C
洗脱缓冲液（0.1% TFA）	5 mL / 25 mL	2–8 °C
产品说明书与质检报告（COA）	1 份	—

技术参数

产品名称	瓜氨酸化泛抗体富集试剂盒（Kcit Kit）
货号	MH-KCIT-10 / MH-KCIT-50
规格	10 次富集 / 50 次富集（以每次 1 mg 酶解肽段计）
抗体来源	兔源多克隆/单克隆抗体（经修饰肽段亲和纯化）
识别表位	瓜氨酸残基（Cit，由精氨酸经 PAD 酶脱亚胺生成）
适用样本	哺乳动物细胞、组织、体液蛋白等酶解肽段
交叉反应	与未修饰精氨酸肽段交叉反应 < 5%
富集倍数	≥ 100×（修饰肽段/非修饰肽段比例提升）
保存条件	抗体偶联凝胶 2–8 °C 保存；衍生化试剂 -20 °C 避光保存
产物与运输	富集产物形式：胶条（浓缩胶处切下，置于 EP 管中，纯水没过）/ 磁珠 / 洗脱液；胶条、磁珠冰袋运输，洗脱液干冰运输

使用方法

样品准备

收集细胞（≥ 5×10⁶ 个）或组织（≥ 50 mg），加入含蛋白酶抑制剂与去修饰酶抑制剂（如 TSA、NAM）的裂解液，超声裂解后 14,000 g 离心取上清，BCA 定量。

蛋白酶解

按 1:50（w/w）加入胰蛋白酶，37 °C 酶解过夜；酶解肽段经 C18 除盐柱纯化并冻干。

抗体富集

将修饰泛抗体偶联磁珠/凝胶与肽段（建议抗体:蛋白 = 1:50–1:100，单次富集蛋白投入量 0.5–2 mg）在结合缓冲液中 4 °C 旋转孵育过夜。

洗涤与洗脱

依次用洗涤缓冲液 I、II、III 清洗 3–4 次，去除非特异性吸附；随后用洗脱缓冲液洗脱目标修饰肽段，C18 除盐后冻干备用。

质谱检测 / 验证

富集产物进入 LC-MS/MS 修饰组学检测（可交由 Mass Hub 组学服务完成）；或以印迹转移用于化学发光/荧光检测，验证整体修饰水平变化。

数据分析

质谱原始文件经数据库检索（含对应修饰变量修饰类型），完成修饰位点鉴定、定量与差异分析，交付标准修饰组学报告。

送样与产物运输

送样建议	细胞 ≥ 5×10⁶ 个/样；组织 ≥ 50 mg/样；或直接送酶解后肽段（≥ 0.5–2 mg 蛋白当量）。
富集产物形式	胶条（SDS-PAGE 浓缩胶处切下，放入 EP 管中，纯水没过胶条）、磁珠或洗脱液。
运输条件	胶条、磁珠：冰袋（4 °C）运输；洗脱液：干冰运输。避免反复冻融。

注意事项

样品处理全程需加入去修饰酶抑制剂；瓜氨酸化样品建议同时加入 PAD 抑制剂（如 Cl-amidine、GSK484），避免体外脱亚胺使修饰水平虚高。
富集实验建议保持抗体与肽段投入量比例稳定；不同批次样品间保持一致以保证定量可比性。
洗脱后肽段请尽快除盐冻干，-80 °C 保存，避免反复冻融。
本试剂盒仅供科研使用（RUO），不得用于临床诊断。

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