十年质谱沉淀 · 专注修饰组学与靶向富集材料021-20273656 · info@mass-hub.com
磷酸化肽段富集试剂盒
磷酸化是真核细胞最普遍的翻译后修饰之一，磷酸化肽段在酶解产物中占比极低、信号易被大量非磷酸化肽段掩盖。本试剂盒以 IMAC（Fe³⁺/Ga³⁺）与 TiO₂ 双体系金属亲和材料为核心，可从复杂酶解肽段中特异性捕获丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸磷酸化肽段，配合高分辨质谱即可完成全蛋白水平磷酸化位点的大规模鉴定与定量；亦可用于磷蛋白免疫沉淀产物的进一步分级富集。磷酸化是真核细胞最丰富的翻译后修饰，由激酶/磷酸酶动态调控，几乎参与所有信号转导过程。酪氨酸/丝氨酸/苏氨酸磷酸化谱是激酶药物靶点发现、信号通路解析与免疫细胞活化研究的基石数据。
| 组分 | 规格（10 rxn / 50 rxn） | 保存条件 |
|---|---|---|
| IMAC 亲和富集材料（磁珠） | 500 µL / 2.5 mL | 20% 乙醇，2–8 °C，勿冻融 |
| TiO₂ 亲和富集材料 | 100 mg / 500 mg | 2–8 °C 避光干燥 |
| 结合缓冲液（5×） | 10 mL / 50 mL | 2–8 °C |
| 洗涤缓冲液 I / II / III（10×） | 各 10 mL / 各 50 mL | 2–8 °C |
| 洗脱缓冲液（碱性洗脱液） | 5 mL / 25 mL | 2–8 °C |
| 产品说明书与质检报告（COA） | 1 份 | — |
| 产品名称 | 磷酸化肽段富集试剂盒（Phos Kit） |
|---|---|
| 货号 | MH-PHOS-10 / MH-PHOS-50 |
| 规格 | 10 次富集 / 50 次富集（以每次 1 mg 酶解肽段计） |
| 富集原理 | IMAC（Fe³⁺/Ga³⁺）与 TiO₂ 金属亲和双重富集 |
| 富集对象 | 丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸磷酸化肽段 |
| 适用样本 | 哺乳动物细胞、组织、体液蛋白等酶解肽段 |
| 特异性 | 非磷酸化肽段本底吸附低，酸性肽段干扰经缓冲液体系控制 |
| 富集通量 | 单次实验可鉴定 10,000+ 磷酸化位点（HeLa 标准测试） |
| 保存条件 | 亲和材料 2–8 °C 保存 |
| 产物与运输 | 富集产物形式：胶条（浓缩胶处切下，置于 EP 管中，纯水没过）/ 磁珠 / 洗脱液；胶条、磁珠冰袋运输，洗脱液干冰运输 |
收集细胞（≥ 5×10⁶ 个）或组织（≥ 50 mg），加入含蛋白酶抑制剂与去修饰酶抑制剂（如 TSA、NAM）的裂解液，超声裂解后 14,000 g 离心取上清，BCA 定量。
按 1:50（w/w）加入胰蛋白酶，37 °C 酶解过夜；酶解肽段经 C18 除盐柱纯化并冻干。
将 IMAC/TiO₂ 亲和材料与酶解肽段（单次富集蛋白投入量 0.5–2 mg）在结合缓冲液中混合孵育，磷酸化肽段被特异性保留于金属亲和位点上。
依次用洗涤缓冲液 I、II、III 清洗 3–4 次，去除非特异性吸附；随后用洗脱缓冲液洗脱目标修饰肽段，C18 除盐后冻干备用。
富集产物进入 LC-MS/MS 修饰组学检测（可交由 Mass Hub 组学服务完成）；或以印迹转移用于化学发光/荧光检测，验证整体修饰水平变化。
质谱原始文件经数据库检索（含对应修饰变量修饰类型），完成修饰位点鉴定、定量与差异分析，交付标准修饰组学报告。
| 送样建议 | 细胞 ≥ 5×10⁶ 个/样；组织 ≥ 50 mg/样；或直接送酶解后肽段（≥ 0.5–2 mg 蛋白当量）。 |
|---|---|
| 富集产物形式 | 胶条（SDS-PAGE 浓缩胶处切下，放入 EP 管中，纯水没过胶条）、磁珠或洗脱液。 |
| 运输条件 | 胶条、磁珠：冰袋（4 °C）运输；洗脱液：干冰运输。避免反复冻融。 |
我们的技术团队将在 1 个工作日内响应，为您定制专属实验方案。
