概述
磷酸化是真核细胞最丰富的翻译后修饰，由激酶/磷酸酶动态调控，几乎参与所有信号转导过程。酪氨酸/丝氨酸/苏氨酸磷酸化谱是激酶药物靶点发现、信号通路解析与免疫细胞活化研究的基石数据。
技术原理
酶解肽段经 磷酸化亲和材料（IMAC / TiO₂ 金属亲和）富集，特异性保留携带磷酸基团的肽段；经洗涤洗脱后进入高分辨 LC-MS/MS，以磷酸化为可变修饰完成位点鉴定与定量，配合 TiSAX 分级可进一步提升鉴定深度。
技术优势
- ✓ 金属亲和富集通量高、成本低
- ✓ 位点定量深度 10,000+
- ✓ 与分级策略联用进一步提升覆盖
- ✓ 激酶底物筛选与信号研究的经典方案
实验流程
应用方向
激酶药物靶点发现与验证
免疫细胞活化的信号网络解析
受体酪氨酸激酶（RTK）通路研究
磷酸化依赖的蛋白相互作用研究
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Olsen JV, Blagoev B, Gnad F, et al. Global, in vivo, and site-specific phosphorylation dynamics in signaling networks. Cell. 2006, 127(3):635-648.
[2] Humphrey SJ, Azimifar SB, Mann M. High-throughput phosphoproteomics reveals in vivo insulin signaling dynamics. Nat Biotechnol. 2015, 33(9):990-995.
配套试剂盒
本服务所用磷酸化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。