概述
2-羟基异丁酰化（Khib）是2014年首次系统报道的新型组蛋白赖氨酸酰基化修饰，富集于转录起始位点附近并与活性基因表达正相关。其修饰水平受代谢中间物供应影响，可作为连接细胞代谢状态与表观遗传调控的重要窗口。
技术原理
酶解肽段与高亲和力2-羟基异丁酰化修饰泛抗体（anti-2-hydroxyisobutyrylation）偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜，特异性捕获携带2-羟基异丁酰化修饰的肽段；经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱，修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测，在数据库检索中以2-hydroxyisobutyrylation为可变修饰完成位点鉴定；结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略，即可实现全蛋白水平2-羟基异丁酰化修饰组的精确相对定量，进而筛选2-羟基异丁酰化修饰调控的关键蛋白与位点。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集，2-羟基异丁酰化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化，批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套试剂盒可自行操作，亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
代谢重塑与酰基CoA代谢通量研究
表观遗传与基因转录调控
肿瘤及代谢性疾病的修饰标志物发现
HDAC/SIRT 等修饰酶调节剂的药理机制研究
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Zheng L, Li C, Ma X, et al. Functional interplay of histone lysine 2-hydroxyisobutyrylation and acetylation in Arabidopsis under dark-induced starvation. Nucleic Acids Res. 2021, 49(13):7347-7360.
配套试剂盒
本服务所用2-羟基异丁酰化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。