概述
赖氨酸乙酰化是最经典、研究最广泛的酰基化修饰,由组蛋白乙酰化转移酶(HAT)催化、去乙酰化酶(HDAC)逆转,广泛参与基因转录调控、代谢酶活性调节与细胞命运决定。中心代谢通路众多酶的乙酰化状态与肿瘤、代谢性疾病及衰老进程密切相关,是修饰组学研究的第一入口。
技术原理
酶解肽段与高亲和力乙酰化修饰泛抗体(anti-Acetylation)偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜,特异性捕获携带乙酰化修饰的肽段;经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱,修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测,在数据库检索中以Acetylation为可变修饰完成位点鉴定;结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略,即可实现全蛋白水平乙酰化修饰组的精确相对定量,进而筛选乙酰化修饰调控的关键蛋白与位点。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集,乙酰化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化,批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套试剂盒可自行操作,亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品(富集前) | BCA 定量,避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Choudhary C, Kumar C, Gnad F, et al. Lysine acetylation targets protein complexes and co-regulates major cellular functions. Science. 2009, 325(5942):834-840.
[2] Choudhary C, Weinert BT, Nishida Y, et al. The growing landscape of lysine acetylation links metabolism and cell signalling. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014, 15(8):536-550.
配套试剂盒
本服务所用乙酰化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售,支持自建流程。
