全蛋白修饰组学 · 乙酰化

Proteome-wide Acetylation Omics

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概述

赖氨酸乙酰化是最经典、研究最广泛的酰基化修饰,由组蛋白乙酰化转移酶(HAT)催化、去乙酰化酶(HDAC)逆转,广泛参与基因转录调控、代谢酶活性调节与细胞命运决定。中心代谢通路众多酶的乙酰化状态与肿瘤、代谢性疾病及衰老进程密切相关,是修饰组学研究的第一入口。

技术原理

酶解肽段与高亲和力乙酰化修饰泛抗体(anti-Acetylation)偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜,特异性捕获携带乙酰化修饰的肽段;经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱,修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测,在数据库检索中以Acetylation为可变修饰完成位点鉴定;结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略,即可实现全蛋白水平乙酰化修饰组的精确相对定量,进而筛选乙酰化修饰调控的关键蛋白与位点。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin乙酰化修饰肽段亲和富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

代谢重塑与酰基CoA代谢通量研究
表观遗传与基因转录调控
肿瘤及代谢性疾病的修饰标志物发现
HDAC/SIRT 等修饰酶调节剂的药理机制研究

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

[1] Choudhary C, Kumar C, Gnad F, et al. Lysine acetylation targets protein complexes and co-regulates major cellular functions. Science. 2009, 325(5942):834-840.

[2] Choudhary C, Weinert BT, Nishida Y, et al. The growing landscape of lysine acetylation links metabolism and cell signalling. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014, 15(8):536-550.

配套试剂盒

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