全蛋白修饰组学 · 脱酰胺化/酰胺化

Proteome-wide Deamidation / Amidation Omics

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概述

脱酰胺化是蛋白质中天冬酰胺(Asn)或谷氨酰胺(Gln)残基脱氨转化为天冬氨酸(Asp)或谷氨酸(Glu)的过程,可在生理条件下经琥珀酰亚胺/戊二酰亚胺中间体自发发生,也可由转谷氨酰胺酶等酶催化,引入负电荷并改变蛋白等电点、局部结构、稳定性与相互作用。在人体内,脱酰胺化可随时间累积,导致蛋白质和肽的异构化、构象改变与老化,对衰老、免疫功能及阿尔茨海默病等神经退行性疾病有重要影响。酰胺化则通常指多肽 C 端由肽基甘氨酸 α-酰胺化单加氧酶(PAM)催化生成 C 端酰胺,许多激素和神经肽需此修饰才能获得完整活性和抗降解能力。二者从相反方向调控蛋白/肽的电荷与功能,共同构成电荷异质性的重要来源,在生物药质量分析、蛋白稳定性与老化研究中具有重要意义。

技术原理

针对脱酰胺化/酰胺化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到脱酰胺化/酰胺化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

PARP 抑制剂药理机制与 DNA 损伤修复研究
类风湿关节炎 ACPA 与自身免疫表位研究
肽类激素加工与内分泌研究
营养-代谢暴露的蛋白层面标记研究

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

该修饰类型属于新近系统鉴定的新型翻译后修饰,文献仍在快速积累。我们的技术团队持续跟踪最新研究进展,欢迎联系我们获取该修饰类型的定制研究方案与文献支持。

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