概述
瓜氨酸化由PAD酶家族将精氨酸转化为瓜氨酸，改变蛋白电荷与结构。瓜氨酸化组蛋白参与中性粒细胞胞外陷阱（NETs）形成与自身免疫表位暴露，抗瓜氨酸化蛋白抗体（ACPA）是类风湿关节炎分类标准的核心指标，也是肿瘤免疫治疗新兴研究热点。
技术原理
酶解肽段与高亲和力瓜氨酸化泛抗体（anti-Kcit）偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜，特异性捕获携带瓜氨酸化修饰的肽段；经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱，修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS，在数据库检索中以Citrullination为可变修饰完成位点鉴定；结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略，即可实现全蛋白水平瓜氨酸化修饰组的精确相对定量，进而筛选瓜氨酸化修饰调控的关键蛋白与位点。必要时亦可并行采用化学衍生/探针路线交叉验证。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集，瓜氨酸化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化，批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套泛抗体富集试剂盒可直接下单，亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
PARP 抑制剂药理机制与 DNA 损伤修复研究
类风湿关节炎 ACPA 与自身免疫表位研究
肽类激素加工与内分泌研究
营养-代谢暴露的蛋白层面标记研究
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Li P, Li M, Lindberg MR, et al. PAD4 is essential for antibacterial innate immunity mediated by neutrophil extracellular traps. J Exp Med. 2010, 207(9):1853-1862.
配套试剂盒
本服务所用瓜氨酸化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。