概述
赖氨酸生物素化由全羧化酶合成酶（holocarboxylase synthetase）催化羧化酶底物蛋白，同时也是BioID/TurboID邻近标记技术的核心输出。生物素-链霉亲和素超强亲和体系使其在蛋白相互作用与亚细胞空间蛋白质组学中应用广泛。
技术原理
酶解肽段与高亲和力生物素化修饰泛抗体（anti-Biotinylation）偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜，特异性捕获携带生物素化修饰的肽段；经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱，修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测，在数据库检索中以Biotinylation为可变修饰完成位点鉴定；结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略，即可实现全蛋白水平生物素化修饰组的精确相对定量，进而筛选生物素化修饰调控的关键蛋白与位点。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集，生物素化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化，批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套试剂盒可自行操作，亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
BioID/TurboID 邻近标记蛋白质组学
羧化酶家族功能与代谢研究
蛋白相互作用与亚细胞空间图谱
可逆亲和纯化策略开发
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Roux KJ, Kim DI, Raida M, et al. A promiscuous biotin ligase fusion protein identifies proximal and interacting proteins in mammalian cells. J Cell Biol. 2012, 196(6):801-810.
配套试剂盒
本服务所用生物素化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。