概述
棕榈酰化是半胱氨酸侧链的可逆S-十六烷基化修饰,由PAT/DHHC酶家族催化、APT酶去修饰,像分子开关一样调控蛋白膜定位、转运与稳定。Wnt、STAT3、Ras等肿瘤关键蛋白均依赖棕榈酰化发挥功能,棕榈酰化组学已成为肿瘤靶向研究的新热点。
技术原理
针对棕榈酰化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到棕榈酰化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。
技术优势
- ✓ 无需修饰抗体,适用新型修饰的普遍路线
- ✓ 探针/衍生条件按修饰类型专属优化
- ✓ 可与其他修饰富集串联,一次取样多修饰并行
- ✓ 从方法开发到项目交付全程技术团队支持
实验流程
应用方向
小G蛋白膜定位与信号转导研究
他汀类/FTI 等药物的脱靶效应评估
蛋白膜转运与细胞器互作机制
肿瘤 Wnt/STAT3 等脂修饰依赖通路研究
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品(富集前) | BCA 定量,避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Martin BR, Cravatt BF. Large-scale profiling of protein palmitoylation in mammalian cells. Nat Methods. 2009, 6(4):322-324.
