全蛋白修饰组学 · 棕榈酰化

Proteome-wide Palmitoylation Omics

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概述

棕榈酰化是半胱氨酸侧链的可逆S-十六烷基化修饰,由PAT/DHHC酶家族催化、APT酶去修饰,像分子开关一样调控蛋白膜定位、转运与稳定。Wnt、STAT3、Ras等肿瘤关键蛋白均依赖棕榈酰化发挥功能,棕榈酰化组学已成为肿瘤靶向研究的新热点。

技术原理

针对棕榈酰化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到棕榈酰化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

小G蛋白膜定位与信号转导研究
他汀类/FTI 等药物的脱靶效应评估
蛋白膜转运与细胞器互作机制
肿瘤 Wnt/STAT3 等脂修饰依赖通路研究

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

[1] Martin BR, Cravatt BF. Large-scale profiling of protein palmitoylation in mammalian cells. Nat Methods. 2009, 6(4):322-324.

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