概述
赖氨酸三甲基化（Kme3）是研究最深入的组蛋白标记之一：H3K4me3标记活性基因启动子、H3K27me3介导Polycomb抑制、H3K9me3锚定异染色质。三甲基化在分化发育、肿瘤表观遗传与免疫细胞编程中均有核心地位。
技术原理
酶解肽段与高亲和力三甲基化修饰泛抗体（anti-tri-Methylation）偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜，特异性捕获携带三甲基化修饰的肽段；经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱，修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测，在数据库检索中以tri-Methylation为可变修饰完成位点鉴定；结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略，即可实现全蛋白水平三甲基化修饰组的精确相对定量，进而筛选三甲基化修饰调控的关键蛋白与位点。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集，三甲基化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化，批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套试剂盒可自行操作，亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
干细胞分化与发育的表观遗传机制
肿瘤表观遗传分型与预后研究
组蛋白甲基转移酶/去甲基化酶功能研究
代谢供体库变化的蛋白层面读出
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Greer EL, Shi Y. Histone methylation: a dynamic mark in health, disease and inheritance. Nat Rev Genet. 2012, 13(5):343-357.
配套试剂盒
本服务所用三甲基化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。