概述
赖氨酸巴豆酰化（Kcr）2011年首次在组蛋白上被系统鉴定，富集于基因增强子区域并与减数分裂后基因激活密切相关。巴豆酰化由巴豆酰CoA供体驱动、可被SIRT家族去酰基化酶逆转，在急性髓系白血病、精子发生与代谢调控中均有重要功能，是近年来高分文章的高频修饰。
技术原理
酶解肽段与高亲和力巴豆酰化修饰泛抗体（anti-Crotonylation）偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜，特异性捕获携带巴豆酰化修饰的肽段；经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱，修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测，在数据库检索中以Crotonylation为可变修饰完成位点鉴定；结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略，即可实现全蛋白水平巴豆酰化修饰组的精确相对定量，进而筛选巴豆酰化修饰调控的关键蛋白与位点。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集，巴豆酰化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化，批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套试剂盒可自行操作，亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
代谢重塑与酰基CoA代谢通量研究
表观遗传与基因转录调控
肿瘤及代谢性疾病的修饰标志物发现
HDAC/SIRT 等修饰酶调节剂的药理机制研究
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Xu W, Wan J, Zhan J, et al. Global profiling of crotonylation on non-histone proteins. Cell Res. 2017, 27(7):946-949.
[2] Wei W, Liu X, Chen J, et al. Class I histone deacetylases are major histone decrotonylases: evidence for critical and broad function of histone crotonylation in transcription. Cell Res. 2017, 27(6):898-915.
配套试剂盒
本服务所用巴豆酰化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。