全蛋白修饰组学 · 半胱氨酸化

Proteome-wide Cysteinylation Omics

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概述

半胱氨酸化指游离半胱氨酸通过二硫键共价结合到蛋白半胱氨酸残基,在氧化还原缓冲系(GSH/GSSG)失衡时显著增加,是胞外氧化还原环境与蛋白二硫键错配研究的指示性修饰。

技术原理

针对半胱氨酸化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到半胱氨酸化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

氧化应激与抗氧化防御机制研究
线粒体功能障碍与代谢病研究
NO/H₂S 气体信号分子通路研究
炎症与神经退行性疾病的氧化损伤评估

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

该修饰类型属于新近系统鉴定的新型翻译后修饰,文献仍在快速积累。我们的技术团队持续跟踪最新研究进展,欢迎联系我们获取该修饰类型的定制研究方案与文献支持。

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