全蛋白修饰组学 · 亚硝基化

Proteome-wide Nitrosylation Omics

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概述

S-亚硝基化是一氧化氮(NO)信号对蛋白半胱氨酸的可逆修饰,被称为"氧化还原版的磷酸化",参与血管张力调节、神经元信号与线粒体呼吸调控,是NO/sGC药物通路研究的关键环节。

技术原理

针对亚硝基化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到亚硝基化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

氧化应激与抗氧化防御机制研究
线粒体功能障碍与代谢病研究
NO/H₂S 气体信号分子通路研究
炎症与神经退行性疾病的氧化损伤评估

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

[1] Hess DT, Matsumoto A, Kim SO, et al. Protein S-nitrosylation: purview and parameters. Nat Rev Mol Cell Biol. 2005, 6(2):150-166.

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