全蛋白修饰组学 · 戊二酰化

Proteome-wide Glutarylation Omics

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概述

赖氨酸戊二酰化(Kglu)由色氨酸/赖氨酸代谢中间体戊二酰CoA供体化产生,2014年被证实为受SIRT5调控的代谢相关修饰。戊二酰化与线粒体代谢、有机酸血症等代谢紊乱密切相关。

技术原理

针对戊二酰化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到戊二酰化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

代谢重塑与酰基CoA代谢通量研究
表观遗传与基因转录调控
肿瘤及代谢性疾病的修饰标志物发现
HDAC/SIRT 等修饰酶调节剂的药理机制研究

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

[1] Yao W, Hu X, Wang X. Crossing epigenetic frontiers: the intersection of novel histone modifications and diseases. Signal Transduct Target Ther. 2024, 9. DOI: 10.1038/s41392-024-01918-w.

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