全蛋白修饰组学 · 丙酮酰化

Proteome-wide Pyruvoylation Omics

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概述

丙酮酰化以糖酵解核心中间体丙酮酸/丙酮酰CoA为供体,将糖酵解通量变化直接映射到蛋白修饰层面,是能量代谢重编程研究的新兴读出指标。

技术原理

酶解肽段与高亲和力丙酮酰化修饰泛抗体(anti-Pyruvoylation)偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜,特异性捕获携带丙酮酰化修饰的肽段;经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱,修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测,在数据库检索中以Pyruvoylation为可变修饰完成位点鉴定;结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略,即可实现全蛋白水平丙酮酰化修饰组的精确相对定量,进而筛选丙酮酰化修饰调控的关键蛋白与位点。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin丙酮酰化修饰肽段亲和富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

代谢重塑与酰基CoA代谢通量研究
表观遗传与基因转录调控
肿瘤及代谢性疾病的修饰标志物发现
HDAC/SIRT 等修饰酶调节剂的药理机制研究

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

该修饰类型属于新近系统鉴定的新型翻译后修饰,文献仍在快速积累。我们的技术团队持续跟踪最新研究进展,欢迎联系我们获取该修饰类型的定制研究方案与文献支持。

配套试剂盒

本服务所用丙酮酰化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售,支持自建流程。

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