概述
赖氨酸琥珀酰化（Ksu）由三羧酸循环中间体琥珀酰CoA供体化产生，带负电的琥珀酰基可显著改变蛋白表面电荷与活性。琥珀酰化高度富集于线粒体代谢酶，SIRT5为其主要去琥珀酰化酶，与代谢性疾病、心血管疾病及肿瘤代谢密切相关。
技术原理
酶解肽段与高亲和力琥珀酰化修饰泛抗体（anti-Succinylation）偶联的磁珠/琼脂糖凝胶在 4 °C 孵育过夜，特异性捕获携带琥珀酰化修饰的肽段；经充分洗涤去除非修饰背景后洗脱，修饰肽段富集倍数可达百倍以上。富集产物进入高分辨 LC-MS/MS 检测，在数据库检索中以Succinylation为可变修饰完成位点鉴定；结合 SILAC / TMT / DIA 等定量策略，即可实现全蛋白水平琥珀酰化修饰组的精确相对定量，进而筛选琥珀酰化修饰调控的关键蛋白与位点。
技术优势
- ✓ 位点级特异性富集，琥珀酰化修饰鉴定深度显著提升
- ✓ 抗体-磁珠体系操作标准化，批次重现性好
- ✓ 兼容 SILAC / TMT / DIA 全部主流定量策略
- ✓ 配套试剂盒可自行操作，亦可交由服务团队完成
实验流程
应用方向
代谢重塑与酰基CoA代谢通量研究
表观遗传与基因转录调控
肿瘤及代谢性疾病的修饰标志物发现
HDAC/SIRT 等修饰酶调节剂的药理机制研究
送样建议
| 细胞样品 | ≥ 5×10⁶ 个细胞/样品 | 裂解前 PBS 清洗，含去修饰酶抑制剂裂解液处理 |
|---|---|---|
| 组织样品 | ≥ 50 mg/样品 | 液氮速冻研磨，-80 °C 保存，干冰运输 |
| 蛋白总量 | ≥ 1–2 mg/样品（富集前） | BCA 定量，避免高盐/去污剂残留 |
| 重复要求 | 每组生物学重复 ≥ 3 | 组间样品处理条件保持一致 |
参考文献
[1] Rardin MJ, He W, Nishida Y, et al. SIRT5 regulates the mitochondrial lysine succinylome and metabolic networks. Cell Metab. 2013, 18(6):920-933.
[2] Weinert BT, Schölz C, Wagner SA, et al. Lysine succinylation is a frequently occurring modification in prokaryotes and eukaryotes and extensively overlaps with acetylation. Cell Rep. 2013, 4(4):842-851.
配套试剂盒
本服务所用琥珀酰化修饰肽段亲和富集材料同步以试剂盒形式销售，支持自建流程。