全蛋白修饰组学 · 类泛素化

Proteome-wide SUMOylation Omics

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概述

SUMO化(类泛素化)将SUMO家族小蛋白连接至靶蛋白赖氨酸,参与转录调控、DNA损伤修复、核质运输与蛋白复合体组装。SUMO化在应激应答中快速、大规模重编程,与神经退行性疾病、肿瘤及罕见病机制密切相关。

技术原理

针对类泛素化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到类泛素化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

E3 连接酶/去泛素化酶底物筛选
PROTAC 与分子胶的降解谱评估
DNA 损伤修复与基因组稳定性研究
抗病毒固有免疫(ISG15)应答研究

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

[1] Hendriks IA, Vertegaal AC. A comprehensive compilation of SUMO proteomics. Nat Rev Mol Cell Biol. 2016, 17(9):581-595.

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