全蛋白修饰组学 · 硫氢化

Proteome-wide Sulfhydration Omics

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概述

S-硫氢化(过硫化)是气体信号分子硫化氢(H₂S)对蛋白半胱氨酸的修饰,可改变酶活性(如GAPDH、p66Shc),参与血管舒张、神经保护与代谢调节,是H₂S供体药物研究的核心机制。

技术原理

针对硫氢化修饰,我们采用化学衍生 / 亲和探针标记前处理策略:利用修饰基团的特异反应将可富集/可检测的报告基团选择性地连接到硫氢化修饰位点,再经亲和材料捕获目标肽段,最后由高分辨 LC-MS/MS 完成位点鉴定与定量。该路线突破了修饰泛抗体可得性的限制,是新型修饰检测的通用方案。

技术优势

实验流程

样品制备细胞 / 组织蛋白提取与酶解Trypsin化学衍生+高效富集EnrichmentLC-MS/MS检测Orbitrap数据分析与报告修饰位点定量

应用方向

氧化应激与抗氧化防御机制研究
线粒体功能障碍与代谢病研究
NO/H₂S 气体信号分子通路研究
炎症与神经退行性疾病的氧化损伤评估

送样建议

细胞样品≥ 5×10⁶ 个细胞/样品裂解前 PBS 清洗,含去修饰酶抑制剂裂解液处理
组织样品≥ 50 mg/样品液氮速冻研磨,-80 °C 保存,干冰运输
蛋白总量≥ 1–2 mg/样品(富集前)BCA 定量,避免高盐/去污剂残留
重复要求每组生物学重复 ≥ 3组间样品处理条件保持一致

参考文献

[1] Mustafa AK, Gadalla MM, Sen N, et al. H₂S signals through protein S-sulfhydration. Sci Signal. 2009, 2(96):ra72.

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